檸檬黃-過氧化物酶標記物的制備方法主要有以下幾種：

過碘酸鈉法

• 原理：辣根過氧化物酶（HRP）的糖基用過碘酸鈉氧化成醛基，加入抗體IgG后該醛基與IgG氨基結合，形成Schiff氏堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發生偶合，在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應末了，用硼氫化na穩定Schiff氏堿。

• 操作步驟：

• 將5mg HRP溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3溶液中；加0.5ml 10mmol/L NaIO4溶液，混勻，蓋緊瓶塞，室溫避光作用2小時。

• 加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3混勻。

• 加入0.75ml小鼠已處理的腹水，或純化單抗等（15mg/ml），混勻。

• 稱取Sephadex G25干粉0.3g，加入一支下口墊玻璃棉的5ml注射器外筒內；隨后將上述交聯物移入注射器外套；蓋緊，室溫作用（避光）3小時或4℃過夜。

• 用少許PBS將交聯物全部洗出，收集洗出液，加1/20V體積新鮮配制的5mg/ml NaBH4溶液，混勻，室溫作用30分鐘；再加入3/20V NaBH4溶液，混勻，室溫作用1小時（或4℃過夜）。

• 將交聯物過Sephadex G200或Sepharose 6B（2.6×50cm）層析純化，分管收集。

改良過碘酸鹽氧化法

• 原理：通過過碘酸鹽氧化HRP，使其產生醛基，然后與檸檬黃特異性抗體的氨基結合，形成穩定的標記物。

• 操作步驟：

• 溶解5mg HRP于1ml超純水中，加入新配制的0.1mol/L多碘酸鈉75μL，置室溫或4℃冰箱反應20分鐘或30分鐘。

• 反應完后裝入透析袋，0.001mol/L pH＝4.0醋酸緩沖液4℃透析過夜，期間需要更換透析液幾次。

• 將抗體用0.01mol/L碳酸緩沖液稀釋至10mg/mL，另外用0.01mol/L碳酸緩沖液將活化好的HRP的溶液pH調至9.5。將0.5ml抗體加入HRP溶液中，置室溫或4℃冰箱反應2小時。

• 加入100μL 4mg/mL硼氫化na，4℃冰箱反應2小時。

• 對0.01mol/L PBS透析過夜，加入保存液-20℃保藏備用。

戊二醛法

• 原理：戊二醛作為雙功能交聯劑，能與HRP和抗體的氨基結合，形成穩定的標記物。

• 操作步驟：

• 將5mg AKP加入1ml抗體溶液（2mg/ml）中溶解，裝入透析袋，于4℃對0.01mol/L PH7.2 PBS透析18小時，換液三次。

• 加入2.5%戊二醛20ul，室溫作用1-2小時，4℃對PBS透析過夜，其間換液三次。

• 換用0.05mol/L PH8.0 Tris-HCl緩沖液透析，4℃過夜，換液三次。

• 取出標記抗體，用含1%BSA的Tris-HCl緩沖液稀釋至4ml，即為AKP標記物原液。

• 每毫升中加入0.4ml甘油，小量分裝，保存備用。

關于我們:

陜西星貝愛科生物科技經營的產品種類包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標記物、蛋白交聯劑、小分子PEG衍生物、點擊化學產品、樹枝狀聚合物、環糊精衍生物、大環配體類、熒光量子點、透明質酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近紅外熒光染料，聚苯乙烯微球，上轉換納米發光顆粒，MRI核磁造影產品，熒光蛋白及熒光探針等等。

溫馨提示：供應產品僅用于科研，不能用于人體！

相關產品：

Biotin-甘草次酸

生物素-亞麻木酚素

生物素標記胰島素 Biotin-Insulin

生物素-昆布多糖，Biotin-Glucan

草酰乙酸-生物素Oxobutanedioic acid-BIOTIN 

OVA-BIOTIN，卵清蛋白修飾生物素

Posaconazole-NHS，泊沙康唑-活化酯

大黃素-生物素，Emodin-BIOTIN

生物素標記巖藻多糖，Biotin-Fucoidan

Protein A-BIOTIN，蛋白A修飾生物素

纖維二糖-生物素，D-(+)-Cellobiose-biotin