氨芐青霉素-過氧化物酶標記物的制備方法有哪些


氨芐青霉素-過氧化物酶標記物的制備方法主要有以下幾種:
化學交聯法
原理:利用化學交聯劑將氨芐青霉素與過氧化物酶進行共價連接。常用的交聯劑有戊二醛等,它能與氨芐青霉素和過氧化物酶分子上的氨基等活性基團反應,形成穩定的共價鍵。
步驟:首先將氨芐青霉素和過氧化物酶分別溶解在適宜的緩沖液中,然后在一定的反應條件下(如適宜的pH值、溫度和反應時間等)加入交聯劑進行反應,反應結束后通過透析、離心等方法進行純化,得到氨芐青霉素-過氧化物酶標記物。
基因工程法
原理:通過基因工程技術將氨芐青霉素抗性基因與過氧化物酶基因進行融合表達,從而得到氨芐青霉素-過氧化物酶標記物。
步驟:首先構建含有氨芐青霉素抗性基因與過氧化物酶基因融合的重組質粒,然后將重組質粒轉化到合適的宿主細胞中進行表達,最后通過細胞破碎、離心、層析等方法對表達產物進行分離純化,得到氨芐青霉素-過氧化物酶標記物。
其他方法
利用氨芐青霉素抗性質粒載體:氨芐青霉素抗性質粒載體,其質粒骨架上含有抗氨芐青霉素基因,該基因為β-內酰胺酶的編碼基因與β-半乳糖苷酶α肽編碼基因的融合基因。通過對現有質粒載體質粒骨架上氨芐青霉素抗性基因的改造,來解決β-內酰胺酶泄漏的問題,進而可用于制備氨芐青霉素-過氧化物酶標記物。
在特定條件下利用菌體或細胞制備:例如使用醛縮酶產生菌或通過重組DNA轉化的細胞,在培養的同時,將底物直接加入培養液中,或使用從培養液中分離出來的菌體、洗凈的菌體等進行制備。
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